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怎样保证原位杂交实验操作时的温度?

建议仪器操作，人工操作的话要注意：

（1）对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器进行温控检查，不符合要求的进行更换。

（2）尽可能地保持环境温度在20度以上。

（3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温。

（4）同时检测的样本不超过4块，操作一定要迅速，实验人员要注意一些小部件的温度，尤其是在冬季。

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2）置换成30％的PBST溶液，放置5分钟

3）置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次

4）置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟

5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3）用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

植物组织原位杂交是一种重要的分子生物学技术，它可以用来研究植物基因的表达和调控。该技术利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合，从而确定目标基因的表达模式和位置。本文将介绍植物组织原位杂交的原理、步骤和应用。

原理

植物组织原位杂交的原理是利用DNA探针与目标组织中的RNA或DNA结合，从而确定目标基因的表达模式和位置。DNA探针是一段已知序列的DNA分子，可以与目标RNA或DNA的互补序列结合。在组织原位杂交中，DNA探针通常标记有荧光染料或性同位素，以便于检测。